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詳細(xì)解說Agilent 1260液相色譜儀操作流程及注意事項(xiàng)
1、配制流動(dòng)相，水相置于棕色玻璃瓶中，有機(jī)相置于相應(yīng)無色玻璃瓶中。水相和有機(jī)相必須過濾，濾膜選用0.45有機(jī)系濾膜(尼龍)。注意：過夜的流動(dòng)相必須重新過濾。
2、流動(dòng)相過濾后，置超聲儀中超聲20min。
3、將已超聲的流動(dòng)相輕輕換上，動(dòng)作不要太劇烈，會(huì)產(chǎn)生氣泡，注意不要把有機(jī)相和水相換反了(A是有機(jī)相，B是水相)。
4、將色譜柱接上，注意：流動(dòng)相的流動(dòng)方向必須和色譜柱上的箭頭方向一致。
5、打開計(jì)算機(jī)電源、顯示器開關(guān)，并輸入密碼。
6、依次從上往下打開液相色譜儀上的所有開關(guān)。
7、打開液相色譜在線工作站(online)，輸入密碼。
8、打開的液相工作站上分為四個(gè)小部分，依次為進(jìn)樣器、泵、柱溫箱及檢測(cè)器。在第二個(gè)部分設(shè)置流動(dòng)相的體積及溶劑瓶的總體積。
9、脫氣：旋開purge閥開關(guān)，右擊泵部分，選擇“method”，選擇B相100%，流速1ml/min，選擇確定;右擊泵部分，選擇“control”，選擇pump “on”，10秒后，調(diào)節(jié)流速為3ml/min，10秒后，調(diào)節(jié)流速5ml/min，開始水相脫氣3min，水相脫氣結(jié)束后，將流速按照5ml/min-3ml/min-1ml/min的流程往下調(diào)。然后開始有機(jī)相脫氣，步驟同上，注意流速不可一下子從1ml/min調(diào)到5ml/min，需慢慢調(diào)節(jié)。流動(dòng)相脫氣結(jié)束后，旋緊purge閥開關(guān)。
10、建立樣品的色譜方法：設(shè)置進(jìn)樣體積，選擇洗針進(jìn)樣，注明洗針位置;設(shè)置流動(dòng)相比例、流速及梯度洗脫條件，序列進(jìn)樣時(shí)設(shè)置樣品運(yùn)行時(shí)間和后運(yùn)行時(shí)間;打開柱溫箱，設(shè)置柱溫;打開紫外檢測(cè)燈，設(shè)置檢測(cè)波長(zhǎng)。全部設(shè)置好后，保存方法，不要覆蓋別人的方法。
11、譜圖保存路徑的設(shè)置：View—preferences—data path(第二個(gè)選項(xiàng))—remove舊的文件夾，add自己的文件夾。再打開Sequence—Sequence parameter—選擇Data path為自己的文件夾即可。
12、設(shè)置進(jìn)樣序列，注意序列表的填寫。序列進(jìn)樣后，如想關(guān)閉泵及檢測(cè)器，請(qǐng)點(diǎn)擊Sequence—Sequence parameter選擇shutdown—standby。
13、將樣品按順序擺放在自動(dòng)進(jìn)樣器的托盤上。
14、注意泵壓力是否正常，色譜柱是否漏液，如一切正常，關(guān)上柱溫箱的蓋子。待基線平穩(wěn)后，點(diǎn)擊Sequence進(jìn)樣。
15、進(jìn)樣結(jié)束后，需沖洗色譜柱，色譜柱很脆弱，需用心保護(hù)。
16、液相用完后，請(qǐng)關(guān)閉液相色譜在線工作站，依次關(guān)閉液相色譜儀上的開關(guān)，zui后關(guān)閉計(jì)算機(jī)。
17、將自己的色譜柱換下時(shí)，需用連接管代替色譜柱連在液相上，不可以讓其暴露在空氣中。
18、從計(jì)算機(jī)中拷取譜圖必須使用CD/DVD盤刻錄，不可直接使用U盤。
19、請(qǐng)大家共同維護(hù)液相色譜儀，每次做完液相，請(qǐng)收拾液相臺(tái)面，注意臺(tái)面的整潔，并注意廢液瓶，及時(shí)倒出廢液。
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